如何為Western Blotting選擇最佳的濾膜?
蛋白質印跡是一個術語,是指用于樣品中蛋白質檢測的分析技術。生物樣品從凝膠轉移到膜上,以便在其表面緊密檢測。這是蛋白質分析的常規過程,可提供有關給定樣品的半定量和定量數據。為確保此過程的準確性,請選擇zui佳類型的膜以傳遞所需的信號。它必須同時抵抗非特異性和背景結合。該選擇很大程度上取決于蛋白質樣品的特性和該過程中預期的下游檢測。
在Western印跡中選擇PVDF膜的因素:
蛋白質印跡優選使用兩種主要類型的膜。它們是硝酸纖維素膜和PVDF或聚偏二氟乙烯膜。在這兩個之中選擇zui佳選擇需要考慮以下特定因素:
評估蛋白質結合能力:
如果您需要更高的結果靈敏度,則zui好使用PVDF濾膜,因為它們具有很高的蛋白質結合能力。這些過濾器的容量為170-200μg/ cm2。這種能力使PVDF注射器過濾器可以檢測低表達的蛋白質。在借助PVDF膜進行抗體檢測的步驟中,您還將獲得很高的背景噪音。另一方面,硝化纖維過濾器中的背景噪聲可能會略低,但它們不允許PVDF的檢測靈敏度。
評估身體特征:
已知PVDF過濾器比大多數其他過濾器類型更耐用,更堅固。它們為測序目的提供了更好的耐化學性。您可以剝離并探測這些膜而不會造成信號損失。當暴露于刺激性化學物質時,PVDF過濾器可以維持處理并保持彈性。因此,在進行zui終選擇之前,請在產品資料中檢查其物理特性。
詢問孔尺寸:
通常,這兩種硝化纖維素和PVDF注射器過濾接 ?可以以各種孔徑大小被發現。您必須根據樣品的物理特性選擇合適的尺寸。尺寸范圍可以從0.1um至0.45um。對于大多數蛋白質印跡應用,理想的孔徑是0.45。但是,對于低分子量的樣品,優選使用0.1或0.2 um的孔徑。
評估綁定屬性和膜格式:
蛋白質分子將通過偶極和疏水相互作用與PVDF膜結合。因此,進行選擇時請仔細檢查此功能。在這里,您還必須考慮在該過程中使用的膜格式。它取決于靈活性,價格,便利性和要使用的傳輸系統。選擇預先潤濕的過濾器,以在應用中獲得更大的通量,便利性和靈活性。預切膜是減少工藝時間并確保更高重現性的可行選擇。
因此,當檢測高分子量蛋白質時,PVDF過濾器是從應用中獲得理想結果的zui佳選擇。
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